Предисловие

Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» (ОАО «ВНИИС») на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 18 июня 2015 г. Nfl 47—2015)

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 сентября 2015 г. N» 1392-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 7218-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2016 г.

5    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 7218:2007 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям» («Microbiology of foods and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations»), IDT, включая изменение Amd. 1:2013.

Международный стандарт разработан подкомитетом ISO/ТС 34/SC 9 «Микробиология» Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВЗАМЕН ГОСТ ISO 7218-2011

ГОСТ ISO 7218-2015

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случав пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федералыюго агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

III

ГОСТ ISO 7218-2015

Содержание

1    Область применения....................................................................................................................................1

2    Нормативные ссылки ...................................................................................................................................1

3    Помещения....................................................................................................................................................2

3.1    Общие положения ................................................................................................................................2

3.2    Условия безопасности .........................................................................................................................3

3.3    Проектирование лаборатории.............................................................................................................3

3.4    Участки лаборатории ...........................................................................................................................3

3.5    Расположение и оснащение помещений ...........................................................................................4

3.6    Чистка и дезинфекция..........................................................................................................................5

4    Требования к персоналу ..............................................................................................................................5

4.1    Общие положения ................................................................................................................................5

4.2    Квалификация.......................................................................................................................................5

4.3    Проверка квалификации персонала лаборатории ............................................................................6

4.4    Гигиена ......................................... 6

5    Аппаратура и оборудование.........................................................................................................................6

6    Подготовка стеклянной посуды и других лабораторных материалов....................................................24

6.1    Подготовка...........................................................................................................................................24

6.2    Стерилизация/деконтаминация.........................................................................................................24

6.3    Одноразовое оборудование и материалы........................................................................................24

6.4    Хранение чистой стеклянной посуды и других материалов...........................................................24

6.5    Обращение со стерильной стеклянной посудой и другими материалами.....................................24

6.6    Применение деконтаминации и дезинфекции..................................................................................25

6.7    Обработка отходов..............................................................................................................................25

6.8    Мойка....................................................................................................................................................26

7    Приготовление и стерилизация питательных сред..................................................................................26

8    Лабораторные пробы............................................................................ 26

8.1    Отбор проб...........................................................................................................................................26

8.2    Транспортирование.............................................................................................................................26

8.3    Получение проб ..................................................................................................................................27

8.4    Хранение.............................................. 27

8.5    Проба (навеска) для исследования............................................. 27

9    Экспертиза (исследование.........................................................................................................................28

9.1    Гигиенические меры предосторожности при проведении исследований .....................................28

9.2    Приготовление исходной суспензии и разведений..........................................................................29

10    Подсчет..................................... 29

10.1    Общие положения....................................................................... 29

10.2    Подсчет при использовании плотных питательных сред..............................................................30

10.3    Расчеты и выражение результатов, полученных на плотных средах.........................................32

10.4    Подсчет колоний дрожжей и плесеней............................................................................................38

10.5    Подсчет при использовании жидких сред.......................................................................................38

11    Метод выявления (качественный метод).......................................... 44

11.1    Общие положения.............................................................................................................................44

11.2    Принцип................................................................... 44

11.3    Измерение неопределенности.........................................................................................................44

12    Метод идентификации (подтверждения)................................................................................................45

12.1    Общие положения...................................................................... 45

12.2    Приготовление чистой культуры......................................................................................................45

12.3    Окрашивание по Граму (модифицированный метод Хакера)......................................................45

12.4    Использование биохимических наборов для идентификации......................................................46

12.5    Применение нуклеиновых зондов для идентификации.................................................................46

12.6    Серологические методы ............................................................ 47

13    Протокол испытаний..................................................................................................................................47

14    Валидация (обоснованность) микробиологических методов................................................................48

14.1    Валидация (обоснованность) стандартных методов.....................................................................48

14.2    Валидация (обоснованность) альтернативных методов...............................................................48

14.3    Валидация (обоснованность) собственных методов............... 48

15    Обеспечение качества результатов/контроля качества    исполнения..................................................48

15.1 Внутренний контроль качества........................................................................................................48

15.2    Эталонные штаммы...........................................................................................................................48

15.3    Внешний контроль качества (оценка качества сторонней организацией) ..................................48

Приложение А (справочное) Свойства некоторых дезинфицирующих веществ......................................49

Приложение В (справочное) Доверительные интервалы для методики подсчета колоний....................50

Приложение С (обязательное) Определение наиболее вероятного числа..............................................54

Приложение D (обязательное) Подсчет колоний в случав двух чашек и одного разведения................61

Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов

ссылочным межгосударственным стандартам ....................................................................66

Библиография.................................................................................................................................................67

V

Введение

При проведении микробиологических исследований особенно важным является следующее:

-    необходимо выделять и подсчитывать только те микроорганизмы, которые присутствуют в пробах:

-    следует исключить загрязнение окружающей среды микроорганизмами.

Чтобы достичь этого, необходимо уделять особое внимание личной гигиене и использовать рабочие методики, гарантирующие, насколько это возможно, исключение загрязнения извне.

При проведении микробиологических экспертиз является важным знание микробиологических методов и исследуемых микроорганизмов. Также важно, чтобы исследования проводились с максимальной аккуратностью, включая вопросы контроля и регистрации, которые могут влиять на результаты и вычисление количества микроорганизмов, а также вызывать сомнения в полученных результатах.

В конечном счете, ответственность лежит на руководителе лаборатории, который определяет, являются ли методические приемы безопасными и приемлемыми в рамках установившейся лабораторной практики.

Большое количество манипуляций может, например, непреднамеренно приводить к перекрестному загрязнению, и поэтому аналитику требуется всегда проверять точность результатов, полученных посредством методик, используемых в лаборатории.

Чтобы проводить экспертизы правильно, необходимо предпринимать определенные правила безопасности, касающиеся оснащения и оборудования лаборатории.

Необходимо предпринимать меры предосторожности не только по причине гигиены, но также и для того, чтобы гарантировать удовлетворительную воспроизводимость результатов. Невозможно предусмотреть все меры для всех возможных ситуаций, но настоящий стандарт, по меньшей мере, предусматривает основные правила приготовления, стерилизации, хранения питательных сред и использования соответствующего оборудования.

Следование правилам, изложенным в настоящем стандарте, поможет обеспечить безопасность персонала. Дополнительную информацию по этому вопросу можно найти в литературе, указанной в разделе «Библиография».

VI

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

Microbiology of food and animal feed.

General requirements and guidance for microbiological examinations

Дата введения — 2016—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает общие требования и дает рекомемдации/варианты по трем основным направлениям:

-    внедрение стандартов Технического комитета ISO/ТС 34/SC 9 или ТС 34/SC 5 по обнаружению и подсчету микроорганизмов, здесь и далее называемых соответствующими «стандартами на конкретный метод испытания»;

-    надлежащая лабораторная практика для микробиологических лабораторий, исследующих пищевые продукты (в задачи настоящего стандарта не входит их описание, для этого имеются специальные справочники);

-    руководство по аккредитации микробиологических лабораторий (в настоящем стандарте описываются технические требования согласно приложению В, (44) для аккредитации микробиологических лабораторий национальными органами).

Дополнительные требования по исследованиям в области молекулярной биологии приведены в ISO 22174.

Настоящий стандарт распространяется на исследования бактерий, дрожжей и плесеней. Допускается применение настоящего стандарта при исследованиях паразитов и вирусов при условии дополнения конкретными рекомендациями.

Настоящий стандарт не распространяется на исследования токсинов и других продуктов метаболизма микроорганизмов (например, аминов).

Настоящий стандарт применяется в микробиологии пищевых продуктов, кормов для животных, окружающей среды производства пищевых продуктов и производства сырья для пищевых продуктов.

2    Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные документы. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

ISO 835. Laboratory glassware — Graduated pipettes (Посуда лабораторная стеклянная. Градуи-рованные пипетки)

ISO 6887-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)

ISO 6887-2:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила для приготовления мяса и мясных продуктов)

ISO 6887-3:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 3: Specific rules for the preparation

Издание официальное

of fish and fishery products {Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов)

ISO 6887-4:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления продуктов, кроме молока и молочных продуктов)

ISO 6887-5:2010 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products {Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб для анализа, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 5. Специальные правила подготовки молока и молочных продуктов)

ISO 8199:2005 Water quality — General guidance on the enumeration of microorganisms by culture (Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом посева на питательной среде)

ISO 8655-1:2002 Piston-operated volumetric apparatus — Part 1: Terminology, general requirements and user recommendations (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 1. Терминология, общие требования и рекомендации пользователю)

ISO 8655-2:2002 Piston-operated volumetric apparatus — Part 2: Piston pipettes (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 2. Пипетки, приводимые в действие поршнем)

ISO 8655-3:2002 Piston-operated volumetric apparatus — Part 3: Piston burettes (Устройства мерные. приводимые в действие поршнем. Часть 3. Бюретки, приводимые в действие поршнем)

ISO 8655-4:2002 Piston-operated volumetric apparatus — Part 4: Dilutors (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 4. Разбавители)

ISO 8655-5:2002 Piston-operated volumetric apparatus — Part 5: Dispensers (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 5. Раздаточные устройства)

ISO 8655-6:2002 Piston-operated volumetric apparatus — Part 6: Gravimetric methods for the determination of measurement error (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 6. Гравиметрические методы для определения ошибки измерения)

ISO 8655-7:2005 Pistonoperated volumetric apparatus — Part 7: Nongravimetric methods for the assessment of equipment performance (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 7. Негравиметричоские методы для оценки рабочих характеристик оборудования)

ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and performance testing of culture media (Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и проверка эксплуатационных характеристик питательных сред)

ISO 16140:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Protocol for the validation of alternative methods (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Протокол проверки достоверности альтернативных методов)

ISO/TS 19036:2006 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines for the estimation of measurement uncertainty for quantitative determinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководство для оценки неопределенности измерения количественных показателей) ISO 22174:2005 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens - General requirements and definitions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах. Общие требования и определения]

3 Помещения

3.1 Общие положения

В данном разделе представлены общие требования и принципы планирования и организации при размещении микробиологической лаборатории.

Экспертизу проб на стадии производства пищевого сырья (особенно для приемки проб и стандартной подготовки проб) следует проводить отдельно от исследования других проб, чтобы уменьшить риск перекрестного загрязнения.

ГОСТ ISO 7218-2015

3.2    Условия безопасности

Проектирование лаборатории должно учитывать требования безопасности, которые будут зависеть от типа эпидемиологической опасности микроорганизма. По этому принципу микроорганизмы классифицируются на четыре категории риска:

-    1-я группа опасности (группа патогенности) (отсутствие риска или очень низкий риск для отдельного человека и общества).

Вероятность заражения таким микроорганизмом человека или животного мала.

-    2-я группа опасности (группа патогенности) (умеренный риск для отдельного человека, низкий риск для общества).

Это патоген, который может вызвать заболевание у человека или животного, но не представляющий серьезной угрозы для сотрудников лаборатории, общества или окружающей среды. Контакт с таким микроорганизмом в лаборатории может вызвать серьезную инфекцию у человека, но имеются способы эффективного лечения и профилактические меры, а риск распространения инфекции ограничен.

-    3-я группа опасности (группа патогенности) (высокий риск для индивидуума, низкий риск для общества).

Это патоген, который способен вызвать тяжелую болезнь у человека или животного, но обычно не распространяется от одного инфицированного индивидуума к другому. Существуют способы эффективного лечения и меры профилактики.

4-я группа опасности (группа патогенности) (высокий риск для индивидуума и для общества).

Это патоген, который обычно вызывает тяжелую болезнь у человека или животного и легко передается от больного к здоровому человеку или животному прямым контактом или с помощью другого механизма передачи возбудителя. Эффективных способов лечения и профилактических мер обычно не существует.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Группа опасности микроорганизма, распространенного в пределах конкретной страны, устанавливается соответствующими национальными нормативными документами.

3.3    Проектирование лаборатории

Рекомендации и правила по принципам обустройства лабораторий, описываемые ниже, применимы к исследованиям по выявлению микроорганизмов, относящихся к 1-й. 2-й и 3-й группам опасности в области микробиологии пищевых продуктов.

Следует принять во внимание, что в зависимости от конкретного национального законодательства может возникнуть необходимость в дополнительных морах безопасности.

3.4    Участки лаборатории

3.4.1    Общие положения

Лаборатория включает отдельные участки, предназначенные для работы с пробами и их исследованием (см. 3.4.2) и общие помещения (см. 3.4.3). Они должны быть раздельными.

3.4.2    Участки, предназначенные для работы с пробами и их исследованном

Необходимо, чтобы лаборатория имела отдельные помещения или четко обозначенные зоны

для следующих операций:

•    приемки, регистрации и хранения проб;

-    подготовки проб, особенно в случае сырья (например, порошкообразные продукты, содержащие высокое количество микроорганизмов);

-    экспертизы проб (начиная от исходной суспензии), включая инкубацию (термостатирование) посевов;

•    манипуляций с предполагаемыми патогенами;

-    хранения контрольных и других штаммов;

-    приготовления и стерилизации питательных сред и оборудования;

-    хранения питательных сред и реактивов:

-    экспертизы пищевых продуктов на стерильность;

-    дезактивации (обеззараживания);

-    подготовки стеклянной посуды и другого оборудования;

-    хранения опасных химических веществ, предпочтительно в предназначенных для этого боксах. шкафах, отдельных комнатах или строениях.

3

3.4.3 Общие участки

Отдельно должны быть предусмотрены следующие участки:

-    входы, коридоры, лестницы, лифты,

-    административные помещения (например, комната для секретаря и офисные комнаты, комнаты для работы с документами и т. д.);

-    раздевалки и туалеты;

-    помещение для хранения архива;

-    кладовые;

-    комнаты отдыха.

3.5 Расположение и оснащение помещений

3.5.1    Цели

Цель состоит в том. чтобы условия окружающей среды, в которой проводят микробиологические исследования, не влияли на достоверность получаемых результатов исследований.

Помещения располагают таким образом, чтобы избежать риска перекрестного заражения. С этой целью необходимо соблюдать следующие положения:

a)    организацию помещений лаборатории согласно принципу «нет пути назад», то есть без пересечения потоков;

b)    выполнять процедуры последовательно, придерживаясь правил необходимой безопасности, чтобы гарантировать чистоту и целостность пробы (например, путем использования герметичных и опломбированных контейнеров);

c)    разделять деятельность при выполнении различных этапов работы во времени и пространстве.

Необходимо избегать экстремальных ситуаций, таких как повышенная температура, запыленность. повышенная влажность, пар. шум. вибрация и т. д.

Помещения и площадь для лаборатории должны быть достаточными для поддержания чистоты и порядка в них. Помещения и площадь лаборатории должны быть соизмеримы с объемом проводимых исследований и общей внутренней организации лаборатории. Они должны соответствовать требованиям национальных инструкций или регламентов, если таковые существуют.

3.5.2    Оборудование помещений

Чтобы уменьшить риск загрязнения пылью и. следовательно, микроорганизмами (для 3-й группы опасности необходимо соблюдать национальные нормативные документы), помещения для проведения исследований должны быть построены и оборудованы следующим образом:

a)    стены, потолки и поверхность пола должны быть гладкими, стойкими к моющим и дезинфицирующим средствам, используемым в лаборатории, легко мыться;

b)    полы не должны быть скользкими:

c)    верхние трубы, по которым проходит жидкость, не должны пересекать помещение, если они герметично не изолированы. Все другие навесные конструкции должны быть закрыты, но легко доступны при необходимости их периодической очистки;

d)    при проведении исследований окна и двери должны быть закрытыми. Конструкция окон и дверей должна исключать возможность скопления пыли и облегчать их чистку. Окружающая температура (от 18 °С до 27 °С) и качество воздуха (содержание микроорганизмов, скорость распространения пыли и т. д.) должны удовлетворять условиям проведения исследований. Для этой цели рекомендуется использовать вентиляционную систему, оборудованную фильтрами для очистки поступающего в помещение воздуха и воздуха, удаляемого из помещения;

e)    необходимо установить адекватную систему вытяжной вентиляции, чтобы предотвратить распыление при работе, возникающее при приготовлении дегидратированных питательных сред, пылеобразных и порошковых проб;

0 если исследования необходимо проводить в атмосфере с низким уровнем контаминации, комната должна быть специально оборудована чистым ламинарным шкафом с потоком воздуха и/или безопасным боксом;

д) если необходимо, помещения лаборатории должны быть защищены от вредных воздействий солнечной радиации с помощью ставней или специально обработанных стеклянных панелей. Не допускается устанавливать шторы или жалюзи изнутри, поскольку их трудно чистить, и они могут быть источником пыли.

3.5.3    Прочие условия

Необходимо также предусмотреть выполнение следующих условий:

-    подведение воды надлежащего качества для использования:

-    наличие электрического питания;

4