МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2010

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

2.1. Для проведения испытаний применяют аппаратуру, материалы, реактивы по ГОСТ 10444.1. а также аппаратуру, материалы и реактивы, указанные ниже:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104¹. с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 2 мг (для взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104¹. с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 20 мг (для взвешивания продукта);

термостат, позволяющий поддерживать температуру (24± 1) ¹С;

микроскоп световой биологический или других аналогичных марок;

масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739:

стекла предметные но ГОСТ 9284;

стекла покровные по ГОСТ 6672;

вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;

агар сывороточный БФ:

бромфеноловый синий, водорастворимый, индикатор;

гентамицина сульфат во флаконах по 0,08 г или в ампулах по I или 2 см' водный раствор массовой долей 4%;

окси тетрациклина дегидрат в таблетках по 0.25 г (250000 ЕД):

неомицина сульфат во флаконах по 0.5 г (50000 ЕД) или в таблетках по 0.10 и 0.25 г:

препараты (руппы левомицетина:

левомицетин сукцинат растворимый (для инъекций) во флаконах по 0.5 и 1.0 г; левом и истин в таблетках по 0.25 и 0.5 г; препараты фуппы пенициллина:

бензилпенициллина натриевая саль или калиевая соль во флаконах по 250000. 500000 или 1000000 ЕД:

бензилпенициллина новокаиновая соль во флаконах по 300000.600000 или 1200000 ЕД; новоцин во флаконах по 400000, 800000. 1200000 ЕД: препараты 1руппы стрептомицина:

стрептомицина сульфат во флаконах по 0.25 г (250000 ЕД). 0.5 г (500000 ЕД). I г (1000000 ЕД); стрептосульмицина сульфат во флаконах по 0,25, 0,5 или 1 г; стрептомицина-хлоркальциевый комплекс во флаконах по 0.1.0.2. 0.5 г; дигидрострептомицина сульфат во флаконах по 0.25.0.5 или 1 г:

дигидрострептомицина пантотенат во флаконах по 0.25 г (250000 ЕД). 0.5 г (500000 ЕД). 1 г (1000000 ЕД).

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1.    Приготовление растворов антибиотиков

3.1.1.    Растворы антибиотиков готовят непосредственно перед использованием. Антибиотики в таблетках используют для приготовления растворов при отсутствии антибиотиков для инъекций. При приготовлении растворов антибиотиков из таблеток не допускается проводить взвешивание, так как в таблетках может содержаться разное количество наполнителя. В этом случае приготовление растворов основано на использовании целых таблеток с точно известным содержанием антибиотиков.

Допускается при анализе нишевых продуктов (кроме консервов) проводить приготовление растворов антибиотиков из таблеток с соблюдением правит асептики на стерильной дистныи ро ван ной воде.

3.1.2.    Раствор массовой концентрацией гентамицина сульфата 10 г/дм³:

во флакон с 80 мг гентамицина сульфата (для иньскций) вносят 8 см³ стерильной дисгнтлиро-ванной воды, содержимое флакона растворяют. Раствор добавляют к готовой основе среды.

При использовании раствора гентамицина сульфата в ампулах исходят из того, что ампула с I см³ раствора содержит 40 мг гентамицина, а с 2 см — 80 мг.

ГОСТ 10444.12-88 С. 3

3.1.3.    Раствор массовой концентрацией левомицетина сукцината растворимого 50 и 100 г/дм': во флакон с 0,5 или 1,0 г левомицетина (для инъекции) вносят 10 см’ стерильной дистиллированной воды, содержимое флакона растворяют. Раствор добавляют к готовой основе среды.

При использовании левомицетина в таблетках по 0.25 и 0,5 г готовят растворы массовой концентрацией левомицетина 5 г/дм⁵. Для этого 2 таблетки по 0.25 г или 1 таблетку по 0.5 г растирают в ступке, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, смывая дистиллированной водой, стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670. Допускается раствор левомицетина стерилизовать вместе с основой среды.

3.1.4.    Раствор массовой концентрацией окситетрациклина д и гидрата I г/дм³: 1 таблетку по

0.25 г растирают в ступке, переносят в мерную колбу вместимостью 250 см³, смывая дистиллированной водой. Раствор доводят до метки дистиллированной водой, стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

3.1.5.    Растворы препаратов фунпы пенициллина готовят из расчета содержания антибиотика 50000 или 100000 ЕД в 1 см³ раствора:

во флаконы с 250000. 300000. 500000 ЕД вносят соответственно 5, 6. 10 см³ стерильной дистиллированной воды, содержимое флакона растворяют, получая растворы, содержащие в 1 см³ 50000 ЕД антибиотика;

во флаконы с 1000000. 1200000 ЕД вносят соответственно 10. 12 см³ стертыьной дистиллированной воды, получая растворы, содержащие в I см³ 100000 ЕД антибиотика.

3.1.6.    Растворы препаратов фупны стрептомицина массовой концентрацией антибиотика 100 г/дм³: во флаконы с 0.10; 0.25; 0.50 и 1 г антибиотика вносят соответственно 1; 2,5; 5; 10 см³ стерильной дистиллированной воды, содержимое флакона растворяют.

3.1.7.    Раствор массовой концентрацией неомицина сульфид 50 г/дм³: во флакон с 0.5 г неомици-на сульфата Саля инъекций) вносят 10 см³ стерильной дистиллированной воды.

При приготовлении раствора массовой концен фацией неомицина сульфата 10 г/дм³ из таблеток: 2 таблетки по 0.25 г или 5 таблеток по 0,1 г растирают в ступке, порошок переносят в мерную колбу на 50 см³. смывая дистиллированной водой, объем доводят до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации но ГОСТ 26670.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1.    Питательные среды с антибиотиками готовят непосредственно перед использованием.

При приготовлении сред с антибиотиками вначале готовят основы сред. К расплавленной и

охлажденной до температуры <46± 1) *С основе среды добавляют растворы антибиотиков.

3.2.2.    Для приютов.гения питательных сред с антибиотиками используют следующие основы.

3.2.2.1.    Основу среды (среду Сабуро) готовят следующим образом: 40.0 глюкозы. 10.0 г пептона. 18.0 гагара добавляют к 1 дм³ дистиллированной воды. Смесь подпревают, периодически помешивая, до расплавления составных частей, охлаждают до 45—55 ’С. устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 *С 6.5±0.1. разливают в мерные колбы и стерилизуют 15 мин при температуре (121 ±1) 'С. Основу среды хранят при температуре (4±2) °С нс более 14 сут.

Основу среды (среду Сабуро) допускается использовать без добавления антибиотиков при анализе консервов на промышленную стерильность.

3.2.2.2.    Основ;! среды из сухого сывороточного агора БФ.

60.0 г сухого сывороточного агара БФ прибавляют к 1дм' диены.(проданной воды, нагревают до полного растворения (при наличии осадка фильтруют). Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации при 25 'С он составлял 4.2±0.2. Определенный объем среды рахшвают в колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) 'С в течение 15 мин.

Основу среды используют при анализе молока и молочных продуктов.

3.2.3. Для определения дрожжей и плесневых фибов используют среды, указанные в пи. 3.2.3.1—3.2.3.7.

3.2.3.1. Среда агаризованная с левомицетином: к 1 дм³ основы добавляют 2 см³ раствора левомицетина сукцината растворимого (для инъекций) массовой концентрацией 50 г/дм³ или 1 см³ раствора

массовой концентрацией 100 г/дм³. При использовании раствора левомицетина массовой концентрации 5 г/дм' к 980 см' основы добавляют 20 см' раствора.

3.2.3.2.    Среда агаризованная с окситетрациклином: к 900 см’ основы добавляют 100 см' раслюра окситетрациклина дигидрата массовой концентрацией 1 г/дм³.

3.2.3.3.    Среда агаризованная с окситетрациклином и гентамицином: к 895 см' основы добавляют 100 см' раслюра окситетрациклина дигидрата массовой концентрацией 1 г/дм³ и 5 см' раствора гентамицина массовой концентрацией 10 г/дм .

3.2.3.4.    Среда агаризованная с антибиотиками 1рунны пенициллина и стрептомицина: к 1 дм' основы добаатяют 1 или 0.5 см' раствора антибиотика группы пенициллина. содержащего соответственно 50000 или 100000 ЕД. затем к среде добаатяют 0.4 см' раствора антибиотика группы стрептомицина массовой концентрацией 100 г/дм'.

3.2.3.5.    Среда агаризованная с неомицином сульфатом: к 1 дм' основы добаатяют 7 см' раслюра неомицина сульфата массовой концентрацией 50 г/дм .

При использовании раствор;! неомицина сульфата массовой концентрацией 10 г/дм' к 965 см³ основы добаатяют 35 см' раствора.

3.2.3.6.    Солодовое сусло готовят по ГОСТ 10444.1.

Применяют для выяатения дрожжей и плесневых грибов в консервах.

Допускается использование ютовою нсохмеленного пивного суета вместо осахаренного суета, подучаемого из молотого ячменного солода.

3.2.3.7.    Солодовое авизованное сусло готовят по ГОСТ 10444.1.

Для определения дрожжей и плесневых грибов в продуктах, сильно обсемененных микроорганизмами. сусло при нриготоа1ении подкисляют стерильным раствором лимонной кислоты массовой концентрацией 200 г/дм' или стерильным раствором молочной кислоты с объемной долей молочной кислоты 40 % до pH 3.6±0.1. при этом при приготовлении среды увеличивают количество агара до 30 г на I дм³.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1.    Из подготовленной пробы продукта и (или) его разведения отбирают навеску объемом (1±0.1) см³.

4.2.    Продукт и (или) его разведении высевают по ГОСТ 26670 параллельно в две чашки Петри. Посевы заливают расплаатенной и охлажденной до температуры (45±1) *С средой (см. ни. 3.2.2.1: 3.2.3.1—3.2.3.5: 3.2.3.7). Параллельно с этим заливают чашку А Петри 15—20 см' среды для проверки ее стерильности.

Допускается при установлении промышленной стерильности консервов и при выявлении возбудителей порчи в продуктах по 2.0 см' исследуемого материала высевать параллельно в две пробирки с 5 см ' жидкого солодового сусла (см. и. 3.2.3.6).

4.3.    Посевы термостатируют при температуре (24± 1) *С в течение 5 сут. посевы на чашках Петри термостатируют дном вверх.

Через 3 сут термостатировдния проводят предварительный учет типичных колоний или появления характерных признаков роста на жидких питательных средах.

Если в посевах на авизованных средах присутствуют мукоровые. очень быстро растущие грибы, то снятие предварительных результатов необходимо проводить очень осторожно, не допуская того, чтобы споры этих грибов осыпались и дали рост вторичных колоний. Через 5 сут проводят окончательный учет результатов термостатирования посевов. Колонии дрожжей и плесневых фибов разделяют визуально.

Рост дрожжей на агаризованных средах сопровождается образованием крупных, выпуклых, блестящих. серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем. Развитие дрожжей в жилкой среде сопровождается появлением мути, запаха брожения и газа.

Развитие плесневых фибов на питательных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски.

4.4.    Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых фибов.

4.5.    При необходимости для разделения колоний дрожжей и плесневых фибов проводят микроскопические исследования. Для этого из отдельных колоний или из посевов на жидкую среду готовят

300

С. 6 ГОСТ 10444.12-88

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Государственным агропромышленным комитетом СССР

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР но стандартам от 21.09.88 Ns? 3208

3.    В стандарт введен международный стандарт ИСО 7954—87

4.    ВЗАМЕН ГОСТ 10444.12-75, ГОСТ 10444.13-75, ГОСТ 26888-86

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

6.    Ограничение срока действия снято по протоколу № 4—93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и ссршфикации (ИУС 4—94)

7.    ИЗДАНИЕ. (Апрель 2010 г.) с Поправкой (ИУС 8-2009).

302

1

С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. Па территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

298